《猫和老鼠在纽约》从汤姆和杰瑞住进纽约皇家门酒店那一刻开始，汤姆被酒店经理雇来当捕鼠专员，经理穿着一丝不苟的西装，指着酒店说这里住着全世界最挑剔的客人，你不能让任何老鼠出现在他们面前，汤姆拍着胸脯保证完成任务，可他转头就看见杰瑞拖着行李从旋转门走进来，住进了酒店最豪华的套房。皇家门酒店有上百个房间、一个顶楼花园、一间五星级厨房、一条铺着红毯的走廊，还有无数通风管道和电梯井，这些地方全成了汤姆和杰瑞的新战场，汤姆踩着滑板在走廊里追，杰瑞开着玩具车在餐桌下跑，汤姆用吸尘器当武器，杰瑞把吸尘器管改成滑梯，汤姆把电梯按到每一层想堵杰瑞，杰瑞把电梯按钮全按亮让汤姆在每一层开门都挨骂。酒店经理每次看见汤姆都把手指竖在嘴唇上，说安静，可下一秒厨房里就传来锅碗瓢盆砸地的声音，客人们从房间里探出头，有的惊慌，有的兴奋，还有小孩举着手机拍汤姆和杰瑞的追逐大战。小鸭子是一只住在顶楼水池的鸭子，她总爱跟着汤姆和杰瑞凑热闹，斗牛犬是酒店后巷的流浪狗，他和汤姆时而结盟时而翻脸，老鼠帮是一群住在墙里的小老鼠，他们认杰瑞当老大，经常帮杰瑞设陷阱整汤姆。汤姆和杰瑞在纽约遇到了比老房子更复杂的环境，大都会博物馆的恐龙骨架、中央公园的鸽子、地铁站的流浪艺人、时代广场的电子屏，每一个地方都能变成他们的游乐场，汤姆在博物馆里把恐龙骨头撞散，杰瑞在中央公园把鸽子训练成轰炸机，汤姆在地铁站被自己设的捕鼠夹夹住尾巴，杰瑞在时代广场的大屏幕上直播汤姆出丑。可纽约也不全是追逐，有时候汤姆和杰瑞会一起坐在酒店窗台上看外面的车流，杰瑞捧着从厨房偷来的奶酪，汤姆假装没看见，酒店经理在楼下大喊汤姆你在哪里，汤姆和杰瑞对视一眼，然后同时从窗台跳下去继续你追我赶。《猫和老鼠在纽约》把经典追逐搬到大苹果城，让每一次拐角都可能撞见新的麻烦，观众看着汤姆和杰瑞在酒店、公园、博物馆里闹得天翻地覆，会明白不管城市多大，猫和老鼠的战争永远不会结束。主要角色名称包括汤姆、杰瑞、酒店经理、小鸭子、斗牛犬、老鼠帮和皇家门酒店的客人们，而《猫和老鼠在纽约》最后让汤姆和杰瑞站在酒店顶楼，整个纽约的灯光在他们脚下闪成一片，汤姆叹了口气，杰瑞拍了拍他的爪子，好像在说明天继续。